抗體真的是偶聯(lián)上磁性熒光編碼微球的嗎？

在熒光編碼微球的偶聯(lián)方法中，可以用氨基和羧基的共價偶聯(lián)方式，也可以用親和素和生物素的偶聯(lián)方式，但還有一種讓抗體連到微球上的方式經(jīng)常被忽略了，那就是無處不在的物理吸附。

流式熒光編碼微球通常為含有氧化鐵納米粒子的聚苯乙烯微球，表面為各種功能團修飾。長期以來有一個容易忽略的問題，那就是聚苯乙烯表面是疏水的，這種疏水的表面在生理水溶液條件下，能通過疏水相互作用與抗體/抗原等發(fā)生物理結(jié)合。所以我們在將蛋白偶聯(lián)到微球的時候，即使我們采用是某種特定的偶聯(lián)方式，但實際上這個物理吸附作用是不可避免的。而事實上，這種物理吸附的方式也是常用的在表面固定生物大分子的一種方式，如著名的JSR公司提供的表面疏水的磁性微球就可以直接通過物理吸附結(jié)合抗體。

回到流式熒光法的磁性熒光編碼微球連接蛋白，這種吸附作用會帶來什么影響？我們仔細(xì)分析一下，物理吸附是一種不太牢固的固定方式，由總體上較弱的分子間作用力（范德華力）而產(chǎn)生的。它是一個動態(tài)的平衡過程，有一部分吸上去，也會有一部分釋放出來。這對于單因子檢測（流式熒光法應(yīng)該沒太多人會用來測單因子），影響應(yīng)該不大，不管吸附上的還是釋放出來都是它。但是對于聯(lián)合檢測，這種不固定的動態(tài)平衡則會導(dǎo)致本該特異性結(jié)合的抗原/抗體釋放出來，然后被其它不對應(yīng)的磁性熒光編碼微球吸附上去，最終會對檢測的特異性和準(zhǔn)確性造成很大的干擾。

綜上所述，在選擇微球時，信號值高是一個很重要的參數(shù)，但需要思考的是這種高熒光值到底是通過物理吸附還是來自于偶聯(lián)的信號，而這些物理吸附會不會影響聯(lián)合檢測中的特異性和準(zhǔn)確性。